在酶聯(lián)固相免疫實驗中，尤其在簡介ELISA法中，經常會碰到陰性本底的問題。主要是本底過高和不同標本的本底值差異較大。本底或稱背景，是ELISA中的非特異性顯色。底物未經過酶作用而呈現的顏色稱為空白。底物液如配制不當會出現一定的空白值。這個空白值只要不太高（A＜0.05），可從個測定值中減除，并不影響實驗結果。這里研究的是不含待測抗原或抗體的陰性標本在ELISA中出現的本底。從理論上講，只有陽性標本最終才能引出顯色反應，在以下情況會出現本底。

固相載體的吸附

在酶免疫測定中，ELISA的特點是利用固相載體作為分離游離和結合的酶結合物的手段。固相載體與吸附在其上的抗原會抗體形成固相抗原或固相抗體，即免疫吸附劑（Immu-nosorbent）。通常所用的固相載體聚苯乙烯其表面主要是疏水基團，通過疏水鍵與蛋白質結合。之中吸附式物理性的非特異性吸附，雖然蛋白質的分子量、等電點、濃度等對吸附的量有一定的影響，但總的來說各種蛋白質均能吸附在聚苯乙烯載體的表面。因此除在包被時有目的地使抗原或抗體吸附在載體上，在ELISA各個步驟中均有可能發(fā)生干擾物質的吸附，使最終產生與受檢抗原-抗體反應無關的顯色，這是形成本底的主要原因。