單酶反應(yīng)檢測

利用單酶與底物反應(yīng)，然后用各種方法檢測出反應(yīng)前后物質(zhì)的變化情況，從而確定底物的量。這是最簡單的酶法檢測技術(shù)。以谷氨酸脫羧酶為例，L-谷氨酸脫羧酶專一地催化L-谷氨酸脫羧生成γ-氨基丁酸和二氧化碳，生成的二氧化碳可以用氣體檢測法測定。該酶已廣泛地用于L-谷氨酸的定量分析，可使用游離酶、固定化酶或酶電極。檢測二氧化碳可以用二氧化碳電極等。利用脲酶專一地催化尿素水解生成氨和二氧化碳的特性，通過氣體檢測或者使用氨電極、二氧化碳電極等，測出氨或二氧化碳的量，就可確定尿素的量。此外，可用于單酶反應(yīng)檢測的還有葡萄糖氧化酶、膽固醇氧化酶、熒光素酶等。通過單酶催化反應(yīng)進(jìn)行物質(zhì)檢測，具有簡便、快捷、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，是酶法檢測中最常用的技術(shù)，具有廣泛的應(yīng)用前景。

多酶偶聯(lián)反應(yīng)檢測

多酶偶聯(lián)反應(yīng)檢測是利用兩種或兩種以上的酶的聯(lián)合作用，使底物通過兩步或多步反應(yīng)，轉(zhuǎn)化為易于檢測的產(chǎn)物，從而測定被測物質(zhì)的量。多酶偶聯(lián)反應(yīng)檢測已有不少成功應(yīng)用的例子。例如，通過葡萄糖氧化酶與過氧化物酶偶聯(lián)可以檢測葡萄糖的含量，使用時(shí)先將葡萄糖氧化酶、過氧化物酶與還原型鄰聯(lián)甲苯胺一起用明膠固定在濾紙條上制成酶試紙。測試時(shí)將酶試紙與樣品溶液接觸，在一定的時(shí)間內(nèi)試紙即顯色，從顏色的深淺判定樣品液中葡萄糖的含量。還可利用β-半乳糖苷酶與葡萄糖氧化酶偶聯(lián)反應(yīng)檢測乳糖的含量，已糖激酶與葡萄糖氧化酶偶聯(lián)反應(yīng)可以用于測定ATP的含量。