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本Elisa試劑盒僅供研究使用
目的：本Elisa試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中血管內皮細胞粘附分子 1 (VCAM-1)的含量。
人血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1)ELISA試劑盒 實驗原理：
人血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1)ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人血管內皮細胞粘附分子 1 (VCAM-1)水平。用純化的人血管內皮細胞粘附分子 1 (VCAM-1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管內皮細胞粘附分子 1 (VCAM-1)， 再與 HRP 標記的血管內皮細胞粘附分子 1 (VCAM-1)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內皮細胞粘附分子 1 (VCAM-1)呈正相關。 用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值） ，通過標準曲線計算樣品中人血管內皮細胞粘附分子 1 (VCAM-1)濃度。
人血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1)ELISA試劑盒 組成：
樣本處理及要求：
1、血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分） 。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2、血漿：應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分） 。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3、尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分） 。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4、細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/2分） 。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分） 。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5、組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4） ，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分） 。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7、不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
人血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1)ELISA試劑盒 操作步驟：
1、標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔，在第一、第二孔中分別加標準品 100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔， 再在第三、 第四孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。 （稀釋后各孔加樣量都為 50μl，濃度分別為 360μg/L，240μg/L ，120μg/L，60μg/L， 30μg/L） 。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） 、待測樣品孔。 在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍） 。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3、溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4、配液：將 30（48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30（48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7、溫育：操作同 3。
8、洗滌：操作同 5。
9、顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10、終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。
11、測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。
人血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1)ELISA試劑盒 注意事項：
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3、各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4、請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值大于標準品孔第一孔的 OD 值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） 。
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6、底物請避光保存。
7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
9、本試劑不同批號組分不得混用。
10、如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
人血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1)ELISA試劑盒 性能：
1、樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù) R 值為 0.990 以上。
2、批內與批見應分別小于 9%和 11%
20μg/L -400μg/L
保存條件及有效期：
1、試劑盒保存：2-8℃。
2、有效期：6個月