前胃泌素在人胃癌BGC-823細(xì)胞的懸浮腫瘤球中的表達(dá)

牛 茜，楊愛軍，王晨昱，劉偉，李 敏

（730000蘭州，蘭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)研究所，甘肅省新藥臨床前研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室）

[摘要] 目的 研究人胃癌BGC-823腫瘤細(xì)胞系中是否存在懸浮生長(zhǎng)的腫瘤球，檢測(cè)前胃泌素(progastrin，Pro-GRP)在腫瘤球中的表達(dá)。方法 取貼壁生長(zhǎng)的BGC-823細(xì)胞，用有限稀釋法和無血清培養(yǎng)法培養(yǎng)，并利用軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)證實(shí)BGC-823中存在懸浮生長(zhǎng)的具有干細(xì)胞特性的腫瘤球，流式細(xì)胞儀（FCM）檢測(cè)該腫瘤球中ABCG2、CD44、CD166的表達(dá)。ELISA、細(xì)胞免疫熒光、FCM方法比較血清Pro-GRP分別在腫瘤球和貼壁細(xì)胞中的表達(dá)差異。結(jié)果 有限稀釋法和無血清培養(yǎng)法均在BGC-823細(xì)胞系中培養(yǎng)出了懸浮生長(zhǎng)的腫瘤球；克隆形成能力顯示：腫瘤球?yàn)椋?7.63±5.99），貼壁細(xì)胞為（10.75±3.37），二者間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.007） ...

[材料與方法] 人胃癌細(xì)胞系BGC-823為本實(shí)驗(yàn)室保存。DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)液（Gbico公司），胎牛血清(杭州四季青公司)、B27、表皮生長(zhǎng)因子( epidermal growth factor，EGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子( basic fibroblast growth factor, bFGF) ( Gibico[寫錯(cuò)了，多寫了 一個(gè)字母i]公司)、胰島素( 江蘇萬邦公司)、100U/ml青霉素、80 mg/ml鏈霉素、L-谷氨酰胺(Sigma)，胰蛋白酶(武漢博士德公司)。ABCG2[第一次出現(xiàn)請(qǐng)注明中英文全稱]兔抗人mAb，Pro-GRP兔抗人mAb（上海藍(lán)基生物科技有限公司），F(xiàn)ITC標(biāo)記山羊抗兔，DAPI/PI（武漢博士德公司），Pro-GRP-ELISA試劑盒（上海江萊生物科技有限公司[1]），F(xiàn)ACS Aria 型流式細(xì)胞儀(BD公司)，倒置相差熒光顯微鏡（尼康公司）。

[備注] [1]“江萊生物”10年以來一直致力于免疫學(xué)技術(shù)的積累與沉淀，目前江萊生物實(shí)驗(yàn)室占地約3000平米，技術(shù)研發(fā)團(tuán)隊(duì)50余人，配備了全球最先進(jìn)的分析和檢測(cè)設(shè)備，我們通過自主創(chuàng)新以及與國(guó)內(nèi)外的科研單位合作研發(fā)，不斷突破新技術(shù)，目前我們研發(fā)了上千種指標(biāo)，質(zhì)量成熟，并長(zhǎng)期出口到歐美市場(chǎng)，贏得了眾多科研機(jī)構(gòu)的認(rèn)可 ...

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