抗-HCV就是丙型肝炎病毒抗體。HCV病毒體呈球形，直徑小于80nm（在肝細(xì)胞中為36～40nm，在血液中為36-62nm ），為單股正鏈RNA病毒，在核衣殼外包繞含脂質(zhì)的囊膜，囊膜上有剌突。

抗-HCV是目前應(yīng)用最廣泛的用于流行病學(xué)調(diào)查、臨床丙型肝炎病人的篩查和診斷的檢測(cè)項(xiàng)目。至今為止檢測(cè)抗-HCV的方法不斷改進(jìn)。隨著方法的改進(jìn)，敏感性和特異性逐漸提高。根據(jù)Elisa試劑盒中抗原組成成分的不同，目前已經(jīng)研制出三代的檢測(cè)試劑。第一代酶聯(lián)免疫(EIA)檢測(cè)方法首先建立了丙型肝炎的篩查和診斷方法，但其敏感性和特異性較差。1992年發(fā)明了第二代EIA的檢測(cè)方法，在試劑中增加了HCV的多肽片段，其靈敏度和特異性均有了明顯提高，在高危人群檢出丙型肝炎并經(jīng)分子生物學(xué)檢測(cè)證實(shí)其敏感性約95％。第三代試劑進(jìn)一步提高了敏感性至97％，同時(shí)縮短了檢出時(shí)間。

近日，綿陽(yáng)市紅十字中心血站研究人員發(fā)表論文，旨在用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的雙抗原夾心法和間接法檢測(cè)抗-HCV，并對(duì)不同檢測(cè)方法的試劑進(jìn)行評(píng)估。研究指出，雙抗原夾心法的抗-HCV ELISA試劑盒靈敏度和特異性均優(yōu)于間接法。該文發(fā)表在2014年第02期《成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》雜志上。

用1種雙抗原夾心法和4種間接法檢測(cè)抗-HCV血清盤(pán)和不同濃度的室內(nèi)質(zhì)控品，嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)在Xantus全自動(dòng)加樣儀和FAME全自動(dòng)酶免分析儀中進(jìn)行檢測(cè)。

經(jīng)用不同的ELISA法檢測(cè)抗-HCV后，血清盤(pán)中陰性參考品符合率均為20/20，陽(yáng)性參考品符合率均為20/20。雙抗原夾心法靈敏度高，0.05NCU/mL的室內(nèi)質(zhì)控品能完全檢測(cè)出來(lái)，間接法最低檢出為0.5NCU/mL，間接法的10個(gè)單試劑陽(yáng)性標(biāo)本用雙抗原夾心法和RIBA確認(rèn)法檢測(cè)全部為陰性。

抗-HCV Elisa試劑盒對(duì)室溫的要求

ELISA試驗(yàn)反應(yīng)需要一定的時(shí)間，才能進(jìn)入平臺(tái)狀態(tài)，否則反應(yīng)不完全。時(shí)間的長(zhǎng)短又與溫度的高低有關(guān)，所以實(shí)驗(yàn)室室溫的變化會(huì)直接影響酶反應(yīng)進(jìn)入孵箱后在37'℃時(shí)的反應(yīng)時(shí)間，而使Elisa試劑盒規(guī)定的孵育時(shí)間相對(duì)不足或延長(zhǎng)，造成試驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定。據(jù)有關(guān)資料顯示，酶反應(yīng)板分別在4℃室溫和25℃室溫放入37℃的孵箱，可相差10rain的顯色時(shí)間。由此可見(jiàn)ELISA試劑盒反應(yīng)的溫度，時(shí)間對(duì)0D值進(jìn)入平臺(tái)狀態(tài)的影響很明顯。

當(dāng)室溫偏低時(shí)，顯色不充分，測(cè)定值S/CO值變小，易出現(xiàn)假陰性；當(dāng)室溫過(guò)高時(shí)，顯色反應(yīng)迅速，試驗(yàn)室工作人員很難掌握反應(yīng)最佳狀態(tài)，容易出現(xiàn)本底偏深，S/CO值增大，易出現(xiàn)假陽(yáng)性。在Elisa試驗(yàn)中一定要重視試驗(yàn)室的溫度，盡量將室溫控制在18℃~25℃。對(duì)室溫的監(jiān)控室實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量系統(tǒng)的重要組成部分。并按要求將Elisa試劑盒從冷環(huán)境中取出置室溫平衡15~30min后，方能使用。只有這樣，才能減少由實(shí)驗(yàn)室室溫的變化而導(dǎo)致的Elisa試劑盒試驗(yàn)誤差，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確，可靠。