雙位點一步法的原理

Elisa試劑盒雙位點一步法應用識別抗原不同位點2個單克隆抗體（McAb）作雙抗體夾心法測定。包被一個McAb后，同時加入待檢抗原和另一個McAb酶標物，待檢抗原上的2個抗原決定簇同時與固相McAb和酶標McAb結合，形成固相McAb-待檢抗原-酶標McAb復合物，加底物通過顯色反應進行測定。

雙位點一步法的操作步驟

1、將1個McAb與固相載體連接，形成固相McAb。洗滌除去未結合物。

2、同時加入待檢標本和酶標McAb，溫育，是待檢抗原和固相McAb及酶標McAb反應形成雙抗體夾心復合物。洗滌除去未結合物。

3、加底物顯色。

雙位點一步法的應用

適用于雙抗體夾心法的Elisa試劑盒，有些也可用雙位點一步法檢測。如HBsAg同樣可用此法進行檢測，其原理為：將純化的抗HBs吸附于固相載體表面，加入待檢血清（或血漿），同時加入辣根過氧化物酶標記的另一個抗HBs（酶結合物），如血清或血漿中含有HBsAg，則通過溫育形成固相McAb-HBsAg-酶標McAb復合物，加入底物，通過顯色反應進行測定。若血清或血漿中不含HBsAg，通過洗滌除去未結合物，加底物后就不顯色。

雙位點一步法的評價

由于應用McAb，雙位點一步法具有很高特異性，一步法省時、簡便。

當待檢抗原濃度過高時，大量過剩抗原分別飽和固相McAb和酶標McAb而抑制夾心復合物的形成，這種現(xiàn)象稱為鉤狀效應（hook effect），可出現(xiàn)假陰性結果?？蓪⒋龣z標本稀釋后再做或提高抗體試劑的親和力、濃度、純度定以消除鉤狀效應。