雙位點(diǎn)一步法的原理

Elisa試劑盒雙位點(diǎn)一步法應(yīng)用識(shí)別抗原不同位點(diǎn)2個(gè)單克隆抗體（McAb）作雙抗體夾心法測(cè)定。包被一個(gè)McAb后，同時(shí)加入待檢抗原和另一個(gè)McAb酶標(biāo)物，待檢抗原上的2個(gè)抗原決定簇同時(shí)與固相McAb和酶標(biāo)McAb結(jié)合，形成固相McAb-待檢抗原-酶標(biāo)McAb復(fù)合物，加底物通過(guò)顯色反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定。

雙位點(diǎn)一步法的操作步驟

1、將1個(gè)McAb與固相載體連接，形成固相McAb。洗滌除去未結(jié)合物。

2、同時(shí)加入待檢標(biāo)本和酶標(biāo)McAb，溫育，是待檢抗原和固相McAb及酶標(biāo)McAb反應(yīng)形成雙抗體夾心復(fù)合物。洗滌除去未結(jié)合物。

3、加底物顯色。

雙位點(diǎn)一步法的應(yīng)用

適用于雙抗體夾心法的Elisa試劑盒，有些也可用雙位點(diǎn)一步法檢測(cè)。如HBsAg同樣可用此法進(jìn)行檢測(cè)，其原理為：將純化的抗HBs吸附于固相載體表面，加入待檢血清（或血漿），同時(shí)加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的另一個(gè)抗HBs（酶結(jié)合物），如血清或血漿中含有HBsAg，則通過(guò)溫育形成固相McAb-HBsAg-酶標(biāo)McAb復(fù)合物，加入底物，通過(guò)顯色反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定。若血清或血漿中不含HBsAg，通過(guò)洗滌除去未結(jié)合物，加底物后就不顯色。

雙位點(diǎn)一步法的評(píng)價(jià)

由于應(yīng)用McAb，雙位點(diǎn)一步法具有很高特異性，一步法省時(shí)、簡(jiǎn)便。

當(dāng)待檢抗原濃度過(guò)高時(shí)，大量過(guò)剩抗原分別飽和固相McAb和酶標(biāo)McAb而抑制夾心復(fù)合物的形成，這種現(xiàn)象稱為鉤狀效應(yīng)（hook effect），可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。可將待檢標(biāo)本稀釋后再做或提高抗體試劑的親和力、濃度、純度定以消除鉤狀效應(yīng)。