實(shí)驗(yàn)原理

    醛縮酶催化1,6-二磷酸果糖裂解成一分子磷酸二羥丙酮和一分子3-磷酸甘油醛。

    血清醛縮酶活性的連續(xù)監(jiān)測(cè)有兩條途徑：一種是3-磷酸甘油脫氫酶耦聯(lián)法，在NADH存在下磷酸二羥丙酮還原成3-磷酸甘油，于波長(zhǎng)340nm監(jiān)測(cè)吸光度下降速率；另一種是3-磷酸甘油醛脫氫酶耦聯(lián)法，在NAD存在下3-磷酸甘油醛氧化成3-磷酸甘油算，于波長(zhǎng)340nm監(jiān)測(cè)吸光度上升速率。應(yīng)用最多的是根據(jù)前一反應(yīng)途徑建立的測(cè)定方法。分析兩法測(cè)定的主要干擾因素。前者受血液中丙酮酸的干擾，后者受血液中乳酸的干擾。一般情況下，以毫摩爾濃度相比，乳酸的含量要比丙酮酸的含量高十幾倍。所以后者的干擾較大。

    本方法在GALPD偶聯(lián)反應(yīng)前，加入乳酸脫氫酶以消除乳酸的干擾，然后加入底物，啟動(dòng)偶聯(lián)反應(yīng)，保證了測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

實(shí)驗(yàn)方法

1.去血清0.05ml，加入1mlTEA緩沖液和0.05ml工具酶混合液，混勻后，置于37℃水浴中溫育5分鐘。

2.加入0.1ml 54.5mmol/L FDP溶液，混勻，立即放入分光光度計(jì)中，在波長(zhǎng)340nm處，延遲時(shí)間30秒，監(jiān)測(cè)時(shí)間180秒，每30秒讀一次吸光度，計(jì)算平均每分鐘吸光度上升速率。

    一般以吸光度上升速率表示酶活性的高低。

注意事項(xiàng)

    各反應(yīng)物的終濃度：三乙醇胺50mmol/L，1,6-二磷酸果糖4.5mmol/L，砷酸鈉10mmol/L，氧化性輔酶I6mmol/L，3-磷酸甘油醛脫氧酶2500U/L，磷酸丙糖異構(gòu)酶500U/L，乳酸脫氫酶1500U/L。