ELISA技術(shù)檢測(cè)犬瘟熱病的中藥輔助治療臨床效果的研究

張永霞，王金福
(上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，上海)

[摘 要]
在前期應(yīng)用中藥膠囊輔助治療犬瘟熱研究的基礎(chǔ)之上，本研究將上海三家寵物醫(yī)院2014~2016年就診的186只犬瘟熱病犬隨機(jī)分成兩組，第一組96只，僅用西藥治療。第二組90只，在西藥治療的基礎(chǔ)上用課題組研發(fā)的中藥膠囊進(jìn)行輔助治療。后隨機(jī)選取64只(每組32只)，采集治療前和治療7天后的外周血血清中的犬瘟熱病毒抗原進(jìn)行ELISA檢測(cè)。結(jié)果顯示：用藥前中藥輔助治療組的平均病毒含量高于單用西藥組，但經(jīng)t檢驗(yàn)后，P > 0.05，差異不顯著；用藥7天后中藥輔助治療組的平均病毒含量顯著低于單用西藥組，經(jīng)t檢驗(yàn)，P < 0.01，差異極顯著，表明中藥輔助治療能有效地殺滅犬瘟熱病毒。

[藥品]
中藥膠囊中的中藥生石膏、黃芩、黃連等均從上海余天成藥店購(gòu)買；犬六聯(lián)高免血清產(chǎn)自軍需大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院生物制品研究中心；犬瘟熱單克隆抗體生產(chǎn)于北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司；診斷試紙為韓國(guó)瑞必診犬瘟快速診斷試紙。

[試劑]
犬瘟熱病毒(CDV)ELISA試劑盒購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司 [1]。

[ELISA檢測(cè)CDV濃度]
按照上海江萊生物科技有限公司的犬瘟熱病毒(CDV)ELISA試劑盒說明書進(jìn)行檢測(cè)：從室溫平衡20 min后的鋁箔袋中取出96孔板；設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度依次為0、10、20、40、80、160 ng/ml，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μL；樣品孔中加入待測(cè)樣本50 μL，空白孔不加；除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的待測(cè)抗體100 μL，用封板摸封住反應(yīng)孔，37℃恒溫箱溫育60 min；棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350 μL)，靜置1 min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次；每孔加入A、B各50 μL，37℃避光孵育15 min；每孔加入終止液50 μL，15 min內(nèi)，在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到直線回歸方程，將樣品的OD值帶入方程，計(jì)算出樣品的濃度。

[兩組治療前后CDV含量對(duì)比結(jié)果]
以治療情況為橫坐標(biāo)，以兩組CDV濃度的平均值為縱坐標(biāo)，繪制柱狀圖

[參考文獻(xiàn)]
[ 1 ] Yoshida, E., Iwatsuki, K., Miyashita, N., et al. (1998) Molecular Analysis of the Nucleocapsid Protein of Recent Isolates of Canine Distemper Virus in Japan. Veterinary Microbiology, 59, 237-244.

[ 2 ] 李清艷. 動(dòng)物傳染病學(xué)[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社, 2008: 235-237.

[ 3 ] 高琳, 汪崇, 等. 中藥療法和干擾素對(duì)犬瘟熱治療效果的比較研究[J]. 現(xiàn)代畜牧獸醫(yī), 2012(5): 44-47.

[備 注] [1]“江萊生物”10年以來一直致力于免疫學(xué)技術(shù)的積累與沉淀，目前江萊生物實(shí)驗(yàn)室占地約3000平米，技術(shù)研發(fā)團(tuán)隊(duì)50余人，配備了全球最先進(jìn)的分析和檢測(cè)設(shè)備，我們通過自主創(chuàng)新以及與國(guó)內(nèi)外的科研單位合作研發(fā)，不斷突破新技術(shù)，目前我們研發(fā)了上千種指標(biāo)，質(zhì)量成熟，并長(zhǎng)期出口到歐美市場(chǎng)，贏得了眾多科研機(jī)構(gòu)的認(rèn)可 ...

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