原理
蛋白質(zhì)分子具有-NH3+基團(tuán)，當(dāng)棕紅色的考馬斯亮藍(lán)顯色劑加入蛋白標(biāo)準(zhǔn)液或樣品中時(shí)，考馬斯亮藍(lán)染料上的陰離子和蛋白-NH3+結(jié)合，使溶液變?yōu)樗{(lán)色，通過(guò)測(cè)定吸光度可計(jì)算出蛋白含量。
試劑的配制
1、考馬斯亮藍(lán)貯備液 60×1瓶。臨用時(shí)按照所需量用蒸餾水1:4稀釋?zhuān)?倍稀釋?zhuān)?，配成?yīng)用液，4℃貯存。
2、蛋白標(biāo)準(zhǔn)液 0.615g/L蛋白標(biāo)準(zhǔn)液1ml×1支，4℃貯存。
3、配制2%組織勻漿。
操作
1、樣本前處理 ①配制2%組織勻漿稱(chēng)取待測(cè)組織的重量，按重量體積比加生理鹽水制備成10%的組織勻漿，1000-3000r/min，離心10min（根據(jù)所測(cè)指示不一樣，則所需轉(zhuǎn)速不一樣），然后取組織勻漿上清再用生理鹽水按1:9稀釋成1%組織勻漿，或用生理鹽水按1:4稀釋成2%的組織勻漿待測(cè)。②血清可用生理鹽水按血清：生理鹽水1:49稀釋?zhuān)郎y(cè)。
總的來(lái)說(shuō)，測(cè)定范圍為1g/L（mg/ml）左右為宜，請(qǐng)?jiān)谂繙y(cè)試前先做1~2個(gè)樣本的預(yù)試。
2、按表操作
| 試劑 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 |
| DDH2O（ml） | 0.05 | — | — |
| 1g/L標(biāo)準(zhǔn)液（ml） | — | 0.05 | — |
| 樣品（ml） | — | — | 0.05 |
| 考馬斯藍(lán)顯色劑（ml） | 3.0 | 3.0 | 3.0 |
混勻后靜置10min，于595nm波長(zhǎng)處比色（1cm光徑比色杯），用空白管調(diào)零，測(cè)定各管的吸光度。
3、蛋白含量的計(jì)算
蛋白含量（g/L）=（測(cè)定管吸光度-空白管吸光度）/（標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-空白管吸光度）×標(biāo)準(zhǔn)管濃度（g/L）