原理

蛋白質(zhì)分子具有-NH₃⁺基團，當棕紅色的考馬斯亮藍顯色劑加入蛋白標準液或樣品中時，考馬斯亮藍染料上的陰離子和蛋白-NH₃⁺結(jié)合，使溶液變?yōu)樗{色，通過測定吸光度可計算出蛋白含量。

試劑的配制

1、考馬斯亮藍貯備液 60×1瓶。臨用時按照所需量用蒸餾水1:4稀釋（即5倍稀釋），配成應(yīng)用液，4℃貯存。

2、蛋白標準液 0.615g/L蛋白標準液1ml×1支，4℃貯存。

3、配制2%組織勻漿。

操作

1、樣本前處理 ①配制2%組織勻漿稱取待測組織的重量，按重量體積比加生理鹽水制備成10%的組織勻漿，1000-3000r/min，離心10min（根據(jù)所測指示不一樣，則所需轉(zhuǎn)速不一樣），然后取組織勻漿上清再用生理鹽水按1:9稀釋成1%組織勻漿，或用生理鹽水按1:4稀釋成2%的組織勻漿待測。②血清可用生理鹽水按血清：生理鹽水1:49稀釋，待測。

總的來說，測定范圍為1g/L（mg/ml）左右為宜，請在批量測試前先做1~2個樣本的預(yù)試。

2、按表操作

混勻后靜置10min，于595nm波長處比色（1cm光徑比色杯），用空白管調(diào)零，測定各管的吸光度。

3、蛋白含量的計算

蛋白含量（g/L）=（測定管吸光度-空白管吸光度）/（標準管吸光度-空白管吸光度）×標準管濃度（g/L）